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凝胶成像系统中的光源因素

2017-04-14 浏览次数:777

凝胶成像系统概念:
 
    它是以一套可对凝胶进行成像的光学系统,而光源便是其光路系统的重要组成部分,可以说没了光源,成像系统几乎无法运行使用,但与CCD、镜头以及分析软件相比,往往却没有得到应有的重视。我们经常遇到这样的用户,他们知道系统光源出现故障或整个系统报废的时候都不知道凝胶成像透射紫外中有305nm与365nm两种紫外灯管,或者搞不清他们之间有何区别。这其中固然有销售商售后的不到位,但也反映出我们对凝胶成像系统光源的不重视和缺乏足够的了解,希望这篇文章能够帮您理清他们的区别和各自的作用。
 
凝胶成像系统类别:
 
    根据应用的不同,往往不同型号凝胶成像产品配有差异性的光源,大致类型可分为白光光源、紫外光源和高强度三色LED灯,其中白光和紫外光源又分别有透射和反射之分。
1、 不锈钢材质DE-500暗箱机身;
2、 CCD所在位置;
3、 镜头所在位置;
4、 机身光源控制面板,可控制滤光轮位置和激发光源开关;
5、 双侧反射白光光源;
6、 双侧双波长(254nm、365nm)反射紫外光源;
7、 高度可调的抽拉式托盘,供化学发光使用;
8、 透射白光板,可折叠;
9、 双波长(302nm、365nm)紫外透射光源。
 
    在Fluorchem Q多色荧光成行系统中,双侧还安装了三色LED灯光源。
    首先是双侧反射白光光源,也是我们使用zui多的光源,通常作为系统照明光源使用,即放置或调整DNA胶或蛋白胶位置,或在对镜头调整聚焦时使用,当然在对非透明材质的蛋白胶或其他成像物质进行成像时也需开启反射白光。
    其次透射白光,即通常所说白光板,主要用于蛋白质胶拍摄时使用,因为白光板位于透射紫外灯箱上方,所以为不影响透射紫外光源的使用,同时也更节约室内空间,白光板一般可以折叠竖立在箱体后部。
    透射紫外光源,即紫外透射灯箱,主要用于DNA胶拍摄,由于DNA常用的荧光染料是EB(即Ethidium bromide,溴化乙锭),而用标准302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号,可用带CCD成像头的凝胶成像系统拍摄到,所以透射紫外的波长通常是305nm段。
    紫外反射灯源,一般为选配件,主要原因是其使用并不广泛,只是在非透明材质的DNA跑胶载体如纸层析等的成像才需要使用。往往比较常用的还是透明的琼脂糖凝胶与聚丙烯酰胺凝胶,透射光源完全可以满足,所以大部分厂家都只将紫外反射光源作为选配,只是在仪器上预留了位置与接口。还要指出的是抽拉式托盘的使用,由于化学发光成像无需任何光源,属自发光成像,但由于化学发光的信号比较微弱,不稳定,同时高档化学发光凝胶成像系统的镜头往往是手动聚焦,所以需要一个高度可调的托盘专门供化学发光成像使用。此外,上文提到的三色LED灯光源是3个高光强反射激发器(475纳米,、534纳米、632纳米),为多色荧光成像系统的比不可少的组成部分。Fluorchem HD2 的DE-500暗箱还预留连续波长光源光纤接口,以便于将来扩展至连续波长光源(激发光的波长范围400-750nm),涵盖了一些需要特殊激发光的荧光,多应用于多色荧光(Cy3/Cy5)和活体成像。

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