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PCR反应的基本成分

2017-11-09 浏览次数:1065

    模板DNA(待扩增DNA)、引物、4种脱氧核苷酸(dNTPs)、DNA聚合酶和适宜的缓冲液。类似于DNA的自然复制过程,其特异性依靠于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
    PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:
    ①模板DNA的高温变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作预备;
    ②模板DNA与引物的低温退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
    ③引物的适温延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保存复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保存复制链重复循环变性-退火-延伸三过程,就可获得更多的“半保存复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟, 2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

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